Гром - это мой знакомый пёс, добрый и замечательный. Эта фотография из фотосессии устроеной для него на острове Татышев.
Звонок в "Скорую":
- У нас бабушка 98 лет. Онемела. Совсем перестала говорить.
Приехал врач:
- Что, бабушка, вы совсем ничего сказать не можете?
- Да всё хорошо, я нормально говорю...
- А ваши родные утверждают, что вы онемели и совсем не можете разговаривать.
- А о чём с этими пидорасами разговаривать?
В Гильдии Переводчиков WARPFROG завершён перевод романа "Кадия стоит"!
Кадия, находящаяся в непрерывной осаде изливающихся из Ока Ужаса воинств, стоит бастионом против тирании и смерти. Её твердыни и армии веками сдерживали полчища Хаоса, но их суровая непреклонность имеет свои пределы. Когда Тринадцатый чёрный крестовый поход обрушивается на оборону Кадии, и на помощь критически важной планете прибывают силы со всего Империума, ужасный, проводившийся долгое время ритуал подходит к своему завершению, и хрупкий баланс безжалостной войны смещается Из тьмы выходит герой, который возглавляет окружённых защитников лорд-кастелян Урсаркар Крид, но хватит ли стальной мощи Астра Милитарум и силы Адептус Астартес, чтобы не допустить катастрофы и предотвратить падение Кадии? Покуда Крид жив, надежда ещё есть. Покуда дышит хотя бы один защитник, Кадия стоит но рано или поздно всему приходит конец.
А вдруг... Сегодня, гуляя по нашему славном городу наткнулись на такое вот милое объявление. Кому не сложно, поднимите, пост без рейтинга.
Я обещал вчера жениться? Ну, извините.. Психанул.
**********
У женщин нету недостатков. А вот особенности - есть.
**********
Ничто не вечно под луною, завёл мой врач издалека...
**********
А в холодильнике, ночами,еда полезней и вкусней.
**********
О том, что я вас пожалела, я пожалела много раз.
**********
Насчёт спиртного норму знаю, но выпить столько не могу.
**********
У Ольги каменное сердце, вам лучше в голову стрелять.
**********
Вдали приметив пляж нудистский, почти бежали бурлаки.
**********
Есть всё же разум во вселенной, раз не выходит на контакт.
**********
Всего, что нам наобещали никто у нас не отберёт.
**********
Весь день как проклятый сегодня сидел не покладая рук.
**********
По навигатору я в тундре. Зачем здесь негры - не пойму.
**********
Да я сулил златые горы, но вот о шубе речь не шла.
**********
Мужчины ищут женской ласки или чего-нибудь пожрать.
**********
Есть сотни субъективных мнений и объективное моё
**********
Хотел вас встретить хлебом солью да хлеб в берданку не впихнёшь
**********
Вы не машите кулаками вы тут на ринге не один
**********
Придётся выпить за здоровье, само - то ведь оно не пьёт
**********
А вот и пятница, товарищ, кончать работу начинай!
**********
У истинной домохозяйки и педикюр под цвет борща
**********
Я сквозь наркоз хирурга слышу: вот это мурке отдадим
**********
Я мыслю значит существую а вот обратное - не факт
**********
Пришли Альцгеймер с Паркинсоном и долго руку мне трясли
**********
ведь мы не от хорошей жизни так с вами весело живём
**********
как говорится всё проходит но может кое что застрять
**********
хоть паровоз наш и не тянет но как пронзителен гудок
**********
машина власти не буксует она не едет никуда
**********
так повелось рождённый ползать всем объясняет как летать
**********
раз геи так парады любят, то шли бы в армию служить
**********
сначала сделайте дороги, потом искореняйте мат
**********
мы выбирали слуг народа ,теперь прислуживаем им
**********
в народ ходили депутаты лишь только по большой нужде
**********
не выбирают к сожаленью ни президента ни родню
**********
со светлым будущим проблемы придётся славным прошлым жить
**********
как хороша свобода слова, поговорили разошлись
**********
идёт всё к лучшему поверьте но мерзопакостным путём
**********
кому заняться больше нечем, тот утром на работу прёт
**********
видать я очень сексуальный, что жизнь всё трахает меня
**********
всю боль страдания и муку вложил во фразу твою мать
**********
**********
детсадик, школа, вуз, работа потом на пенсию а жить...???
**********.
(с)Сеть
Я работал в телеком компании и там была такая штука Дрим тим:
лучшие руководители по всем направлениям, типа бухгалтер,
клиентский сервис, маркетинг, административно-хозяйственный отдел,
охранник безопасник и тд. Эту Дрим тим награждали путёвкой
куда-нить. И вот попадаю я в Барселону, с коллегами со всей страны
из разных подразделений.
Оглядываюсь, глаз-то и положить не на кого. Мужики все быковатые
(технари), девчи все староватые (ахахах). На общем ужине в отеле я,
канеш, посидел, а потом пару дней гулял в одиночестве сочиняя
новеллы. И тут я вспоминаю, что вот-вот, на днях, а точнее
завтрева быть финалу чемпионата мира по хоккею в котором встретятся
Россия и Словакия. Немедля ни мгновения я начинаю гуглить спорт
бары Барсы центра футбольного мира с легендарным футбольным клубом
Барселона. Естессно, мой испанский оставлял желать лучшего (ноль),
по английски не оч разумели коренные жители и если "айс" они могли
понять (в бары всё-таки звонил, не в костёлы), то "хокки"
отказывались понимать наотрез и просто говорили названия каких-то
коктейлей. Как известно, ищущий до обрящет да и я нашёл.
И тут думаю: негоже болеть за свою сборную без флага! Нашел в Барселоне спорт бар с трансляцией "айс хокки" дак отчего не найти где намайнить флаг российский. Со всего размаха нырнул в гугол и спустя какое-то время нашел русский магазин. Пришел туда как домой вернулся. Огурчики соленые, пельмешки, семечки, хлеб в привычном виде кирпичика, грибочки, о!, а вот и икорочка стоит, но под замком, знаем, мол, мы нашего брата. Но так как я буквально вчера ток приехал, особо не настальгировал, так, окинул взором ассортимент и к продавщице за прилавком. Прям по-русски спрашиваю: есть наш флаг? Она по-русски прям отвечает: Блииинн, День Победы ж был недавно, разобрали все поди, но счас посмотрю. А вы откуда? О! Санкт-Петербург, а как там погода у нас?
Вы тоже из Питера?
Нет, я из Кемерово) Ну, у нас в России?
Нормально погода улыбнулся картошку уже посадили, всё хорошо.
Ну и слава богу. А, дак чего это я, флаг, сейчас, сейчас.
Ушла куда-то в кладовку, причитала там чего-то в итоге с криками
Ура! За Родину, за Сталина выходит сияющая, несет стяг-то
наш в пакете, пылюку отряхивает. Поболтали еще немного да и пошел я
искать бар, где сегодня, несмотря на середину мая в сильную жару, в
футбольной столице будут смотреть финал чемпионата мира по
непонятной для испанцев игре хоккею.
Нашел бар, был он совсем даже не маленький и весь набит словаками, нашими соперниками, кругом одни словацкие флаги, но я уверенным шагом иду в центр за самый большой круглый стол, где вижу свободный стул. 7 словаков и я. В качестве оберега я укутался во флаг и немедленно заказал 4 текилы и одно пиво. Вообще, хоккейные болельщики сильно отличаются от футбольных поэтому особо бояться было нечего, но всё-таки было тревожненько. Как выяснилось позже не зря. Вобщем, игра шла в одну калитку, мы чето там уже после первого периода вели уверенно 3-0 или типа того и было видно, что чемпионами нам сегодня быть. Перед началом третьей двадцатиминутки я прошу у официанта самую большую бутылку шампанского и 7 фужеров для этих панов. Приносят большущую бутыль в ведре и ставят посредине стола. Словаки грустные, я им говорю, ребят, простите, но у вас нет шансов сегодня. Комплимент от русского для вас! Они улыбаются (несильно), мол, да понятно, но могли бы нам и поддаться. Все смеёмся, отдаем друг другу пятюню. Один чувак мою пятюню немного захватывает и на мгновение удерживает в плену. Я виду не подал, мало ли.
Звучит финальная сирена, все расходятся, мы чето болтаем с этими ребятами, заказали еще выпивки и тут я такой чую, как тот самый тип кладет свою руку на мою и начинает гладко двигать в сторону ладони и такой: гоу ту найт клаб?
я такой думаю: ебушкиворобушки!
а в слух говорю: уан момент, май френд, ай гоу ту ватерклозет. Пошёл в сторону туалета, а там и выход на улицу. Вышел и дал стрекоча в сторону отеля. С тех пор я мужиков в барах не угощаю.
Позавчера посетитель ресторана Ranchito Taqueria в Хьюстоне девятью выстрелами в затылок застрелил парня. Потом подошёл, взял у убитого деньги и раздал другим посетителям кафе. И ушел. Полиция ищет этого стрелка, но не чтобы выдвинуть обвинения, а просто пообщаться. Ведь все законно. У убитого с собой был настоящий пистолет. И вошёл в ресторан он ради ограбления, в маске. Убитый требовал у посетителей деньги, наводя оружие на жертв. Даже набрал немалую сумму, но не успел... Закон не нарушен. Техас. 2023, начало
По СТС недавно фильм "Няньки" показывали. И точно так же вырезали сцену, где детишки притворились, что повесились. Просто в одном кадре с жуткой музыкой, мужики открывают дверь, а в другой уже все смеются. Фу.
Но так же многие фильмы не посмотреть на том же кинопоиске и прочих "не пиратских" ресурсах. В "Обмани меня" в первой серии есть фраза "Иначе она всю жизнь проживет с клеймом: Шлюха - дочь конгресмена" и они просто убрали слово "Шлюха" и текста. Губы шевелятся, но это всё. И весь смысл уничтожен.
Нахрен телик)
Найдена собака. Вроде как лайкаЩенок 7 8 месяцев. Пока на
передержке у моей свекрови. Ей 72 года она за ним летает как
пушинка. Отдадим в хорошие руки. Чипа нет. Хозяев месяц искали
многие люди пока до нас не дошел. Тишина. Спокойный, не гавкает в
квартире. К кошкам относится чудесно. Умненький.команды знает.
Очень любит когда гуляет посидеть на всех скамейках пес очень
крупный. Лапастый и головастый. Хвост кольцом в 2 оборота
Находится в Московском районе Пулковское шоссе на данный
момент.
А и еще не особо ест сухой корм. Ласковый кстати еще. Любит
обниматься.
Первая часть здесь
(изображения увеличил с ИИ https://problembo.com/ru/services/image-ai-upscale)
Своими невероятными сравнениями размеров Роман Учитель показывает доисторическую мегафауну и ее современных родственников.
Для создания цифровых иллюстраций Учитель тратит много времени и сил, чтобы сделать все правильно. Во время реконструкции древних животных проще всего полагаться на скелет, говорит он My Modern Met. А зная анатомию, можно достаточно точно воссоздать животное. Самое сложное - это рисунок окраски. Хотя здесь можно положиться на среду обитания. Кроме того, мы сотрудничаем со многими учеными и музеями по всему миру, которые любезно предоставляют нам скелеты или соответствующую информацию.
Результаты говорят сами за себя. Восхитительные для детей и взрослых, эти изображения напоминают о мегафауне, которая когда-то бродила по Земле.
Всем привет.
Пока лежу с распоротым бедром решила пересмотреть свои фото и подумала, а почему бы не поделиться милыми зверушками и с вами.
Итак львы, они забавные, милые, наглые, от них сильно пахнет тухлой рыбой, но все равно - обаяшки.
Как только мы прибыли на Галапагосские острова и заякорились, сразу же получили довесок в виде морского льва
Пртревоженный светом от фонаря он ругался на своём львином и пытался нас спугнуть и вот с первого и по последний день на островах картина была такая
Хорошо, что вода на островах очень холодная была и купаться не хотелось, иначе даже не знаю как бы из воды выходили. Но не только нашу лодку они облюбовали, к друзьям вообще на палубу залез один малыш. А вообще эти милахи были повсюду и совершенно не боялись туристов, даже наоборот рыкали на нас, если мы на их пути были, хотя путь по сути был построен для пешеходов и скамейки,кстати,тоже, но явно львов эти мелочи не интересуют.
Тут малыш пьём мамино молоко.
А здесь охотник один попытался утащить ботинок мужа.
Львенок, играющий с детьми
Вообще они очень забавные и любят резвиться и играть. Вот этот раздобыл песочный доллар затаскивал его на кайак затем сбрасывал в воду и нырял за ним.
Вообще за ними можно вечно наблюдать
На последней фото морской лев и его гарем, они захватили старую рыбалку лодку и живут на ней, местные решили оставить им их дом :)
Желаю всем такой же приятной и размеренной жизни: поел, поспал, искупаться, поиграл и дальше спать
Рано или поздно это нужно было сделать
Оригиналы: Борис Моисеев и Николай Трубач "Голубая луна", а также давно известный вахоёбский мемчик. Лежат в комментариях. ПОМЯНИТЕ ШТОЛЕ ЭТАВА ЧУДНОВА НОБА.
Больше переделок песен в профиле или вк.
Собственно, поймали меня за язык в комментариях к предыдущему посту, деваться некуда, придётся писать )
ACHTUNG! Огромная простыня получилась. Если что, я предупреждал
Про себя особо рассказывать не буду, ибо пост этот не тщеславия ради, а просвещения для. Если коротко, то последние 7 лет своей жизни занимаюсь я, возможно, самой крутой вещью на этом глобусе - делаю лекарства.
Притом лекарства не такие, которые у всех на слуху, типа аспирина там какого-то банального. Нет, про эти препараты большинство людей просто не слышали и в аптеке их не купить, однако они позволяют лечить болезни, которые ещё десяток-два-три лет назад звучали как приговор. Имя этому классу препаратов - моноклональные антитела.
Was ist das?
Разберёмся поподробнее с самим названием. Антитела - это особые белки, вырабатываемые организмом для защиты от чужеродных агентов. Если сильно упростить, то структура антитела похожа на букву Y. Макушки этого игрека будут обладать уникальным свойством опознавать определённую структуру (будь-то какой-то белок бактерии, вируса и т.п.), называемую антигеном, в то время как "ручка" у вообще всех антител (в пределах одного класса, но об этом не здесь) одинаковая. Узнаваемость антигена антителом штука очень специфическая - антителу нужна совершенно конкретная молекула с совершенно конкретной конформацией, всё остальное его не колышет. Никак.
"Ручка" же нужна, в основном для того, чтобы сообщить другим компонентам иммунной системы, что супостат обнаружен и надо с ним что-то делать. Да, ручка по-заумному называется Fc - Fragment crystallizable. Т.к. они у всех антител одинаковые - из них можно вырастить кристалл, потому и кристаллизуемый. А переменная часть именуется Fab - Fragment antigen-binding, тобишь, антиген-связывающий.
Собственно, моноклональные антитела, по сути своей, такие же антитела, только искусственные, в отличие от тех, что содержатся в сыворотке крови (а там их содержится превеликое множество самых разных), эти все как на подбор - одинаковые, произошедшие от одного единственного клона. Потому и моноклональные. Текущий уровень развития технологий позволяет целенаправленно конструировать антитела против конкретных молекулярных мишеней. Так что если мы понимаем, что происходит при той или иной болезни, мы можем придумать для этого антитело.
Существует несколько сценариев использования антител при терапии.
Можно использовать "голое" антитело по его прямому назначению (активация иммунного ответа против мишени, на которую нацелено антитело, например, ритуксимаб), либо, например, использовать антитело в качестве самонаводящейся пули, которая может притащить к раковой клетке немного радиоактивного изотопа (аки террорист-смертник, обвешанный гранатами с выдернутой чекой, ибритумомаб), либо, используя свойство антител связываться с антигеном, просто вырубить какую-нибудь сигнальную цепь в организме (например, вырубив весь наличный IL-6, можно задавить воспалительный процесс при ревматоидном артрите - олокизумаб).
Из приведённых названий антител выделяется окончание -маб. В общем-то, Monoclonal antibody оно и означает. Так что если вы видите непатентованное название (МНН) оканчивающееся на -маб, то знайте - это оно. Лечат ими в основном онкологию, автоимунные заболевания, типа волчанки, ревматоидного артрита и некоторые орфанные заболевания (это те, случаев которых известно пару сотен штук на весь мир, типа болезни Шницлера).
Wie wird's gemacht?
Ну бумага-то стерпит любую писанину. Как сделать-то их? Как вообще лекарства делают? Ну вот, например, такая молекулка...
Знакомьтесь, это парацетамол... В общем-то, практически любой студент-второкурсник с химфака нарисует вам цепочку синтеза этой штуки из широко доступного сырья. Будет там 5-6 стадий. Но в случае с мабами такой подход не прокатит - их молекулы состоят из пары сотен отдельных мономерных звеньев (всего их в белках встречается 20 различных), чередование которых, при этом ещё и нерегулярное. Какой суммарный выход будет у процесса, который включает в себя 200 стадий? Но ведь наши клетки их как-то делают? Хм... клетки... а давайте заставим клетки нарабатывать нужный нам белок! Вот мы и пришли к такой штуке, как биотехнология. Берём какую-нибудь клеточную линию, которую можно без проблем и сильных танцев с бубном выращивать в промышленных масштабах и программируем на производство нашего белка (а это уже генетическая инженерия. Звучит как фантастика, но, на самом деле, давным-давно весьма рутинная операция) и получаем...
А получаем мы пару-тройку тонн коричневой жижи с запахом ношеных недели три носков, которая никак не похожа на ту чудесную панацею, про которую я тут уже столько слов написал. Нужно как-то зёрна отделить от плевел. Вот тут-то и наступает черёд хроматографии.
Что же представляет собой эта дурно пахнущая жижа? Ну... питательная среда, на которой растили клетки, сами клетки, подохшие клетки, ошмётки подохших клеток, продукты жизнедеятельности клеток и... целевой продукт. Целевого продукта, дабы осознавать масштаб проблемы, будет граммов 5 на литр (это считается, на самом деле, очень неплохой продуктивностью). При производстве моноклональных антител в подавляющем большинстве случаев используются клеточные линии на основе CHO - клетки яичника китайского хомячка (Chineese Hamster Ovary, собственно). У них есть несколько ключевых преимуществ - растут в суспензионной культуре (жбан с жижей, в котором плавают клетки. Адгезионные культуры, в противоположность, могут расти только слоем на подложке-матрасике), выделяют целевой продукт в окружающую среду (не надо разрушать клетки - меньше мусора на очистку), дают белок, не отличимый от "родного" (правильный фолдинг и пострансляционные модификации - бактерии и дрожжи так не умеют, хотя продуктивность у них сильно больше). Ну, поскольку продукт у нас находится в растворённом виде и имеет нанометровые размеры, а клетки - это довольно жирные колобки в пару десятков микрон диаметром, логичный первый этап - избавиться от них. Сделать это можно либо фильтрацией, либо центрифугированием. Применяются оба подхода, причём, чем больше масштаб, тем сильнее предпочтение в пользу центрифугирования. В любом случае, эту часть процесса называют осветление или Clarification - жижа из мутной становится прозрачной, однако носкаином от неё разит всё ещё нехило. Мы с ребятами прикидывали, что в двухкубовом реакторе под конец культивирования полощется пара-тройка десятков килограммов биомассы (ну и около 10кг растворённого белка, если продуктивность 5г/л). Надо понимать, что не всякий фильтр не спасует перед таким вызовом (при условии приемлемой площади). Чаще всего применяют глубинные фильтры (примерно как песчаные фильтры на водоканале) на основе диатомита и целлюлозы - клетки и прочий крупный мусор застревают между волокон. Это оптимальное с точки зрения грязеёмкости на единицу площади решение. Выглядят они примерно вот так (насос, подающий и приёмные жбаны не показаны)
Ну, от клеток мы избавились. Теперь нужно как-то выделить сами
антитела. Осложняется задача тем, что продукт - далеко не
единственный белок в растворе. Тут вам и белки из подохших и
развалившихся клеток (вот почему предпочтительно клетки не
разрушать), компоненты питательной среды (там тоже и отдельные
аминокислоты и короткие пептидные фрагменты) и ещё чёрта лысого
только нет (хотя, если хорошо поискать...). И тут нам на помощь
приходит аффинная хроматография. Суть её заключается в очень
специфическом взаимодействии между продуктом и материалом
неподвижной фазы. Собственно, всё очень просто: прогоняем жижу
через колонку с нашим чудо-веществом, продукт к нему прилипает, а
всё остальное утекает в канализацию на станцию деактивации
стоков. Метод беспроигрышный, инфа сотка! Где только взять это
чудо-вещество? Ну, тут есть несколько довольно распространённых
подходов. Например, можно в последовательность ДНК, кодирующую
целевой белок, зашить код нескольких подряд гистидинов в виде
хвостика (т.н. His-tag) и потом за этот хвостик вытягивать белок
при помощи металл-ионной аффинной хроматографии (Ni-IMAC,
например... Ni-Ion Metal Affinity Chromatography, смыть связавшийся
продукт можно похожей на гистидин молекулой - имидазолом). Проблема
в том, чтобы потом убрать этот хвостик (который сам по себе
действует на иммунную систему пациента как красная тряпка на быка)
и никель (аллерген), но если другого выхода нет, то пользуют.
Однако, в случае с антителами другой подход есть. Есть такая
бактерия... Staphylococcus aureus, золотистый стафилококк. Живёт на
коже, не особо полезная, но, если с иммунитетом норм, то проблем не
доставляет. И есть у этой мелкой дряни белок, называемый белком А
(Protein A, ProA). И есть у этого белка одна интересная способность
- связываться с любыми антителами (товарищи зануды, мы говорим
только про IgG, если что. Мы вроде как научпопом занимаемся,
поэтому некоторые допущения и приближения вполне допустимы). Без
разницы на последовательность Fab, так как связывание происходит с
Fc (а он, напомним, одинаковый). Связывание зависит от кислотности
среды - при околонейтральном pH (6,5 - 7,5 чаще всего) происходит
образование комплексов белокА - антитело, а при подкислении до
около 3,5-3,7 - распад. Ну, осталось только взять этот белок А,
пришить его крепко-накрепко к какой-нибудь матрице (чаще всего это
сефароза, по сути, маленькие, но очень пористые мармеладные шарики
диаметром около 90 микрон), чтобы никуда не делся. Это и есть наша
стационарная фаза - при пропускании содержащего продукт раствора,
торчащие в стороны молекулы белка А будут вылавливать молекулы
антител. Чтобы она была действительно стационарной, поместим её в
стеклянный или акриловый цилиндр, с двух сторон ограниченный
сетками, чтобы никуда эти мармеладные шарики не делись. Это уже
хроматографическая колонка. Размеров они бывают разных. В
лаборатории при разработке техпроцесса обычно используют диаметром
от 5мм до 50мм. При масштабировании до пилотного производства -
100-200мм, а при полномасштабном бывают и больше метра. Одно
остаётся постоянным - высота слоя стационарной фазы. Она обычно
бывает не больше 20см, так что промышленная колонка даже не
колонка, а, скорее, блинчик. Вот так вот выглядит пустое чудовище
диаметром 800мм. Весит такой девайс порядка 2 тонн. Пустой. Объём
такой колоночки может быть влёгкую 100-120 литров (все аналитики от
таких цифр тихо ахнули)
В зависимости от марки сорбента (стационарной фазы), один литр колонки может связать 40-80 граммов антител. То что связывание происходит через Fc делает метод универсальным - не важно какой препарат вы чистите, это может быть даже не антитело, а какой-нибудь fusion-protein, у которого от антитела только "ручка", в любом случае вы будете использовать аффинную хроматографию с белком А.
А вот так выглядит колоночка диаметром 26мм. Такие используются в лабораториях при разработке процесса
Для того, чтобы пропускать различные растворы с заданными параметрами (нас интересуют, прежде всего, объём и скорость), используются хроматографы. Размерами они бывают от настольных лабораторных (до 150-600 мл/мин), до здоровенных промышленных шкафов, качающих больше 20 литров в минуту. По сути, хроматограф - это насос, клапанная обвязка входа (выбор раствора/продукта), клапанная обвязка колонки (можно пустить поток в обе стороны, либо мимо колонки), блок детекторов (мониторинг параметров - проводимость раствора/солёность, pH, оптическая плотность, температура и т.д.) и клапанная обвязка выхода (слив, либо сбор продукта) и кучка манометров, стоящих в разных местах системы. Выглядеть может как-то так (слева - kta Pure - до 150мл/мин, в середине - kta Pilot до 600мл/мин, справа - kta Ready - до 500 л/ч).
Все эти штукуёвины давным-давно рулятся с компа при помощи специализированной софтины. Для хроматографов GE/Cytiva (вышеупомянутые kta) она называется "Единорог", ну Unicorn тобишь. Через софтину можно контролировать текущие параметры (с какого входа сосёт, с какой скоростью, какой давляк и т.д.) и производить запись результатов. Блок детекторов после колонки даёт нам представление о том, что же там вообще творится (растворы имеют разную солёность, pH, поглощение ультрафиолета и т.п.), а программа записывает все эти показания в виде графика в зависимости от пропущенного объёма или времени - это называется хроматограмма. Без особого тайного знания (с) и/или поллитра в них, обычно, не разобраться. Ну вот, например...
По графику проводимости мы можем понять зашла/вышла соль на колонку, по графику поглощения УФ (чаще всего - 280нм, тут поглощает белок) мы понимаем, что попёр белок, по графику pH мы понимаем, что колонка уравновешена/не уравновешена/дошла кислота и щас попрёт белок и ещё куча-куча всего... Но, на самом деле, если процесс отлажен, то участие человека можно свести к абсолютному минимуму, прописав программу. Всё взаимодействие оператора с машиной будет сводиться к подключению нужного жбана к нужному порту, да тыканью в диалоговые окна (проверь, что раствор не кончился, подключи жбан-сборник и т.д.) - очень здорово влияет на повторяемость, а это - один из краеугольных камней производства.
Про железяки более-менее понятно. Аффинная хроматография замечательна тем, что даёт сумасшедший фактор очистки. На выходе мы получаем практически чистый раствор антитела (то что это именно то антитело, которое нам нужно, гарантируется на стадии культивирования - одна клеточная линия может производить одну молекулу и это проверяется при её характеризации/аттестации). Впрочем, полупродукт всё ещё может содержать нежелательные примеси (например, ДНК клеток хомячка, которые делали белок, белки этих клеток, налетевший с колонки белок А - тоже не очень полезная штука), кроме того, он может содержать слипшиеся вместе молекулы антител (аггрегаты) или, наоборот, развалившиеся молекулы (продукты деградации).
Для того, чтобы от них избавиться, существуют последующие этапы очистки. Кроме того, в полупродукте могут потенциально содержаться вирусы. Вирусы, которыми могли заболеть клетки. Да, клеточные банки характеризуют на отсутствие вирусов, да, их мониторят во время производства, да, в конце-концов, это грызунячьи вирусы, которыми человек не болеет, но кроме этого процесс очистки должен включать не менее 2 шагов, специально направленных на удаление возможных вирусов. Нужно доказать, что процесс очистки обеспечивает снижение вирусной нагрузки минимум на 15 логов (в 10 с 15 нулями раз), но это предмет совершенно другого разговора. От ДНК и белков клетки хозяина мы можем избавиться при помощи ионообменной хроматографии (в колонке тоже мармеладки, но не с белком А, а с заряженной положительно или отрицательно функциональной группой) - в зависимости от условий проведения хроматографии (прежде всего, pH и солёность раствора) мы можем сделать так, что либо продукт будет садиться на колонку, а примеси - нет, либо - наоборот. Первый способ называется bind-elute mode, второй - flowthrough mode. В последнее время пошла мода именно на Flowthrough хроматографию, т.к. количество примесей на данном шаге уже очень мало и для того, чтобы связать их все, не связывая продукт, достаточно относительно небольшой колонки, а это здорово экономит дорогущий сорбент и растворы при той же эффективности очистки. Так, для примера... в режиме bind-elute на литровую колонку можно посадить 20-30 граммов белка и потом его смыть. А в режиме flowthrough (связываем примеси) через ту же литровую колонку можно пропустить и 1000 граммов белка, потому что свяжет она те же 20-30 граммов, но примесей.
Продукты аггрегации и деградации, казалось бы, легко отделить при помощи гель-фильтрационной хроматографии, которая тупо делит молекулы по размеру. Проблема тут в том, что для хорошего разделения объём нанесения должен быть не больше 10% от объёма колонки (а у нас там пара сотен литров полупродукта стоит...), так что гель-фильтрацию оставьте аналитикам, в промышленном масштабе её никто не применяет (только если очень приспичит и другой возможности ну совсем нет). Поэтому используются другие сорбенты - тут может быть и гидрофобная хроматография (HIC) и ещё одна ионообменная (IEX) и всякие разновидности смешанной (MMC). Всё сугубо индивидуально и зависит от процесса. Что совершенно точно не применяется, так что обращёнка (RPC) и всякая страшная органика в качестве растворителей - только вода, только хардкор. Продукт слишком нежный.
После очистки, однако, раствор всё ещё не пригоден для введения пациенту (а это, кстати, либо подкожно, либо внутривенно. Привет всей гомеопатической нечисти типа оциллококцинума или как там его). В ход вступает последняя установка - тангенциальная фильтрация или TFF (Tangential Flow Filtration). Для неподготовленного глаза выглядеть может как какой-нибудь адронный коллайдер (впрочем, как и большинство других установок), например, вот так
Если не вдаваться в подробности, то работает она подобно почке (ну или гемодиализатору) - старый ненужный раствор отгоняется в слив, через мембрану, поры которой меньше белковой молекулы, постепенно замещается финальным, всё это дело концентрируется, чтобы не приходилось ставить капельницу с трёхлитровым баллоном и готово. Осталось только добавить вспомогательные вещества, чтобы белок при хранении не выпал хлопьями, стерилизовать и разлить по флакончикам.
Может показаться, что то, что я только что описал, где-то там, за гранью фантастики, однако это уже достаточно зрелая технология. На рынке существуют десятки препаратов этого класса и ещё сотни на подходе. Биотехнологические препараты сейчас определённо в тренде (из 10 мировых бестселлеров, наверное, больше половины - биотех) и за ними будущее. Впрочем, есть ещё препараты на основе РНК (но это тоже биотех) и индивидуальная медицина. Кстати, да... в России препараты этого класса тоже производятся. Даже не одной (и даже не двумя) компанией. Как дженерики (тут они называются biosimilar), так и оригинальные. Конечно, наш биотех не так массов, как европейский или американский, но он, если что, существует, существенен и развивается.
Бонусом для техногиков - автоматизированная упаковка промышленной колонки (похоже на трёхсоточку). Я с такой системой не работал, но масштаб суеты примерно понятен, хотя 300мм можно ещё упаковать вручную, как лабораторную. Дальше - 450 и больше, массы деталей растут пропорционально квадрату диаметра и без лебёдок или автоматизированной упаковки уже не обойтись
2.5 года назад я в последний раз пил алкоголь. Бросил я не из-за каких-то глобальных проблем типа здоровья или зависимости, а от того, что перестал получать удовольствие и позитив от него. За эти 2 года я всего один раз испытывал желание даже не выпить, а напиться. Все остальное время у меня не было никакого желания. Моя жизнь абсолютно никак не изменилась, ни в лучшую ни в худшую сторону. Какая у этой басни мораль? - Морали нет никакой. Выводы, которые я сделал - алкоголь никак не помогает и не мешает, мы очень переоцениваем его влияние. Все у нас в голове. Никаких советов и рекомендаций я тоже давать не буду - каждый сам решает что ему хочется делать. Старенький мемас с борькой вам для ностальгии.